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抗虫、抗病、抗逆作物,如转基因抗虫棉;医学上生产胰岛素、干扰素等药物,还用于基因治疗;工业可改良工业微生物品性提高生产效率;环境保护中,构建工程菌处理基因工程具体操作分四步:
     1. 获取目的基因
      从基因文库获取:将生物DNA片段导入受体菌储存,构建文库。根据目的基因信息,用探针钓取目的基因。
      PCR扩增:以含目的基因DNA为模板,设计引物,在Taq酶作用下,经变性、复性、延伸循环,大量扩增目的基因。
      人工合成:已知目的基因序列,用DNA合成仪直接合成。
     2. 构建基因表达载体
      用相同限制酶切割目的基因和载体,如质粒,使其产生相同黏性末端。
      用DNA连接酶将目的基因与载体连接,形成重组DNA分子。
     3. 导入受体细胞
      植物细胞:常用农杆菌转化法,利用农杆菌Ti质粒将目的基因整合到植物染色体。
      动物细胞:常用显微注射法,借助显微操作仪将重组DNA注入受精卵。
      微生物细胞:用Ca2?处理细胞成感受态,使其吸收重组DNA。
     4. 目的基因的检测与鉴定
      分子水平检测:DNA分子杂交看目的基因是否插入;核酸分子杂交检测转录;抗原  抗体杂交检测翻译。
      个体生物学水平鉴定:对转基因生物做抗虫、抗病接种实验,观察性状。污染物。
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